技术简介

蛋白-蛋白相互作用是蛋白质结构与功能研究中最重要的方面之一。GST pulldown实验是一个有效验证酵母双杂交系统的体外试验技术。将靶蛋白与GST（谷胱甘肽S-转移酶）融合表达，并将靶蛋白固化在谷胱甘肽(GSH)亲和树脂上，作为与目的蛋白亲和的支撑物，充当“诱饵蛋白”，目的蛋白溶液过柱，可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”（目的蛋白），洗脱结合物通过SDS-PAGE电泳分离，或联用WB和MS检测，可验证蛋白间的相互作用或筛选获取相应的目的蛋白，从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白。

"诱饵蛋白"和"捕获蛋白"均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。此方法简单易行，操作方便。

应用领域

蛋白互作体外验证。

服务内容

技术优势

1. 我公司拥有成熟的蛋白表达平台。既可以在原核中表达外源蛋白用于Pull down检测，又可以在哺乳动物细胞中共表达蛋白，用于CO-IP检测。

2. 可与酵母双杂交文库的构建筛选及点对点验证结果互相印证，实现对蛋白质互作的筛选，体内鉴定、体外鉴定等立体式检测。

3. 捕获的目的蛋白可用质谱的方法进行检测，进一步构建分子互作网络。

服务流程

1.  构建GST-靶蛋白融合表达载体

2.  GST-靶蛋白的表达

3. GST标签抗体，WB检测融合蛋白的表达情况

4.  细胞裂解，获取总蛋白裂解液

5.  GST-pull-down调取互作结合蛋白

6.  对结合蛋白进行纯化

7.  结果分析

您需要提供以下材料

1. 互作蛋白质名称、基因 ID、物种信息；

2. 诱饵蛋白质及捕获蛋白质表达载体，或用于基因克隆的组织样品，或纯化好的蛋白溶液；

3. 一抗（可用于WB检测和IP实验的GST标签抗体）

您将获得的实验结果

1. SDS-PAGE 电泳检测图；

2. pull down 产物和input Western Blot 检测图；

3. 结果分析报告。

结果图片示例