技术简介

蛋白的酵母双杂交实验是以酵母的遗传分析为基础，研究蛋白间相互作用的一种有效技术手段。转录活化蛋白可以和DNA 上特异的序列结合而启动相应基因的转录反应。这种DNA 结合与转录激活的功能是由其上两个相互独立的结构域，即DNA 结合结构域(Binding Domain, BD)和转录活化结构域(Activation Domain, AD)共同完成的。

以Gal4 系统为例，BD和AD 分别由Gal4 蛋白上不同的两个结构域(1-147aa 与768-881aa)构成。在利用GAL4 系统筛选cDNA 文库或研究蛋白间的相互作用时，DNA 结合结构域与靶蛋白即"诱饵"相结合，转录活化结构域与文库蛋白或要验证的蛋白相结合。一般情况下，单独的BD 可以与GAL4 上游活化序列（GAL UAS）结合但不能引起转录，单独的AD 则不能与GAL UAS 结合；只有当BD 与 AD 分别表达的融合蛋白由于相互作用而导致两者在空间上相互靠近时，BD 与AD 才能与 GAL UAS结合并且引起报道基因的转录，从而激活下游报告基因，通过这一系列实验来验证两个蛋白之间的相互作用。

应用领域

服务内容

技术优势

1. 专业的技术团队使您的实验高效、准确；

2. 丰富的分子实验基础，尤其在酵母杂交中积累了大量的实践经验，有成熟的实验技术，满足客户不同的实验需求

服务流程(图)

酵母双杂交文库构建——诱饵载体构建——诱饵载体自激活检测——文库质粒和诱饵质粒共转酵母感受态细胞——文库筛选、分析

您需要提供以下材料

1.  新鲜组织材料、冻存材料或高质量RNA、诱饵基因的模板

2. 尽可能全面的实验相关信息

交付数据及产品

1. 构建好的双杂交文库甘油菌：

1）文库容量≥10⁶；

2）文库滴度>10⁷cfu/ml；

3）插入片段平均大于500bp（不同物种略有差别）；

4）减低高丰度表达基因10-100倍；

2. 酵母双杂交筛选得到的阳性克隆；

3. 实验过程报告及相关数据图片

实验结果图片示例：