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基本信息
载体类型: | 膜体系酵母双杂交载体 |
载体抗性: | Amp |
载体标签: | N-HA |
筛选标记: | TRP1 |
启动子: | CYC1 |
高拷贝/低拷贝: | 高拷贝 |
载体大小: | 6200 bp |
克隆方法: | 多克隆位点,限制性内切酶 |
5' 测序引物: | CYC1pro: 5’-TACATTAGGACCTTTGCAGC-3’ |
3' 测序引物: | CYC1ter: 5’-GGTTGTCTAACTCCTTCCTT-3’ |
备注: | 如有侵权请产权持有人尽快联系法务15927229196 |
质粒图谱和多克隆位点信息
注意:
客户在我公司选择构建载体服务项目时,请自行提供母源载体。
如要使用本公司保存的母源载体时,本公司不能保证所有母源载体完全符合客户预期,也不承担由此产生的任何责任。
载体描述
泛素(ubiquitin)分子量很小,由 76 aa残基组成;泛素作为降解信号分子,可以连接另外一种蛋白质的 N端,然后被泛素专一性蛋白酶 (UBPs)识别,从而导致与泛素相连的蛋白被酶解。泛素可以人为分成两部分:N端 (Nub),C端 (Cub)。首先,人为地将泛素 Nub的 3位异亮氨酸突变为甘氨酸 (NubI 突变为 NubG)。这样与 Cub的亲合力大大降低,避免了 Cub和 Nub自我结合或接近的可能性。其次,将Cub部分与人工合成的 LexA-VP16转录激活因子融合成一个融合蛋白Cub-LexA-VP16。正常条件下 NubG不与Cub 结合,UBPs也不能识别分离的泛素,转录激活因子也不会被切下来。最后,将要检测的蛋白质分别与NubG和Cub融合,形成 bait融合蛋 (bait-cub-LexA-VP16)和 prey融合蛋白 (prey-NubG)。如果 bait和 prey发生相互作用,就会促使 NubG和 Cub的相互接近,被 UBPs识别,导致 LexA-VP16的解离,进入核内,从而激活报告基因的转录。
膜体系酵母双杂交体系中根据诱饵蛋白质定位不同,需要选用不同的载体,以便于与互作蛋白相连的泛素NubG和Cub-LexA-VP16可以相互作用,从而被泛素特异性蛋白酶(UBPs)识别、切割、启动报告基因表达。
载体序列
ORIGIN
1 gccgcggatg attacgccaa gcgcgcaatt aaccctcact aaagggaaca aaagctggag
61 ctctcatttg gcgagcgttg gttggtggat caagcccacg cgtaggcaat cctcgagcag
121 atccgccagg cgtgtatata tagcgtggat ggccaggcaa ctttagtgct gacacataca
181 ggcatatata tatgtgtgcg acgacacatg atcatatggc atgcatgtgc tctgtatgta
241 tataaaactc ttgttttctt cttttctcta aatattcttt ccttatacat taggaccttt
301 gcagcataaa ttactatact tctatagaca cacaaacaca aatacacaca ctaatctaga
361 actagtatgc agattttcgt caagactttg accggtaaaa ccggaacatt ggaagttgaa
421 tcttccgata ccatcgacaa cgttaagtcg aaaattcaag acaaggaagg aatccctggt
481 ggtccatacc catacgatgt tccagattac gctggatcca agcagtggta tcaacgcaga
541 gtggccatta cggcccggga aaaaacatgt cggccgcctc ggcctctcga gaattcgata
601 tcaagcttat cgataccgtc gacctcgagt catgtaatta gttatgtcac gcttacattc
661 acgccctccc cccacatccg ctctaaccga aaaggaagga gttagacaac ctgaagtcta
721 ggtccctatt tattttttta tagttatgtt agtattaaga acgttattta tatttcaaat
781 ttttcttttt tttctgtaca gacgcgtgta cgcatgtaac attatactga aaaccttgct
841 tgagaaggtt ttgggacgct cgaaggcttt aatttgcggc cggtacccaa ttcgccctat
901 agtgagtcgt attacgcgcg ctcactggcc gtcgttttac aacgtcgtga ctgggaaaac
961 cctggcgtta cccaacttaa tcgccttgca gcacatcccc ctttcgccag ctggcgtaat
1021 agcgaagagg cccgcaccga tcgcccttcc caacagttgc gcagcctgaa tggcgaatgg
1081 acgcgccctg tagcggcgca ttaagcgcgg cgggtgtggt ggttacgcgc agcgtgaccg
1141 ctacacttgc cagcgcccta gcgcccgctc ctttcgcttt cttcccttcc tttctcgcca
1201 cgttcgccgg ctttccccgt caagctctaa atcgggggct ccctttaggg ttccgattta
1261 gtgctttacg gcacctcgac cccaaaaaac ttgattaggg tgatggttca cgtagtgggc
1321 catcgccctg atagacggtt tttcgccctt tgacgttgga gtccacgttc tttaatagtg
1381 gactcttgtt ccaaactgga acaacactca accctatctc ggtctattct tttgatttat
1441 aagggatttt gccgatttcg gcctattggt taaaaaatga gctgatttaa caaaaattta
1501 acgcgaattt taacaaaata ttaacgttta caatttcctg atgcgtattt tctccttacg
1561 catctgtgcg gtatttcaca ccgcataggc aagtgcacaa acaatactta aataaatact
1621 actcagtaat aacctatttc ttagcatttt tgacgaaatt tgctattttg ttagagtctt
1681 ttacaccatt tgtctccaca cctccgctta catcaacacc aataacgcca tttaatctaa
1741 gcgcatcacc aacattttct ggcgtcagtc caccagctaa cataaaatgt aagctttcgg
1801 ggctctcttg ccttccaacc cagtcagaaa tcgagttcca atccaaaagt tcacctgtcc
1861 cacctgcttc tgaatcaaac aagggaataa acgaatgagg tttctgtgaa gctgcactga
1921 gtagtatgtt gcagtctttt ggaaatacga gtcttttaat aactggcaaa ccgaggaact
1981 cttggtattc ttgccacgac tcatctccat gcagttggac gatatcaatg ccgtaatcat
2041 tgaccagagc caaaacatcc tccttaggtt gattacgaaa cacgccaacc aagtatttcg
2101 gagtgcctga actattttta tatgctttta caagacttga aattttcctt gcaataaccg
2161 ggtcaattgt tctctttcta ttgggcacac atataatacc cagcaagtca gcatcggaat
2221 ctagagcaca ttctgcggcc tctgtgctct gcaagccgca aactttcacc aatggaccag
2281 aactacctgt gaaattaata acagacatac tccaagctgc ctttgtgtgc ttaatcacgt
2341 atactcacgt gctcaatagt caccaatgcc ctccctcttg gccctctcct tttctttttt
2401 cgaccgaatt aattcttaat cggcaaaaaa agaaaagctc cggatcaaga ttgtacgtaa
2461 ggtgacaagc tatttttcaa taaagaatat cttccactac tgccatctgg cgtcataact
2521 gcaaagtaca catatattac gatgctgtct attaaatgct tcctatatta tatatatagt
2581 aatgtcgttt atggtgcact ctcagtacaa tctgctctga tgccgcatag ttaagccagc
2641 cccgacaccc gccaacaccc gctgacgcgc cctgacgggc ttgtctgctc ccggcatccg
2701 cttacagaca agctgtgacc gtctccggga gctgcatgtg tcagaggttt tcaccgtcat
2761 caccgaaacg cgcgagacga aagggcctcg tgatacgcct atttttatag gttaatgtca
2821 tgataataat ggtttcttaa tatgatccaa tatcaaagga aatgatagca ttgaaggatg
2881 agactaatcc aattgaggag tggcagcata tagaacagct aaagggtagt gctgaaggaa
2941 gcatacgata ccccgcatgg aatgggataa tatcacagga ggtactagac tacctttcat
3001 cctacataaa tagacgcata taagtacgca tttaagcata aacacgcact atgccgttct
3061 tctcatgtat atatatatac aggcaacacg cagatatagg tgcgacgtga acagtgagct
3121 gtatgtgcgc agctcgcgtt gcattttcgg aagcgctcgt tttcggaaac gctttgaagt
3181 tcctattccg aagttcctat tctctagaaa gtataggaac ttcagagcgc ttttgaaaac
3241 caaaagcgct ctgaagacgc actttcaaaa aaccaaaaac gcaccggact gtaacgagct
3301 actaaaatat tgcgaatacc gcttccacaa acattgctca aaagtatctc tttgctatat
3361 atctctgtgc tatatcccta tataacctac ccatccacct ttcgctcctt gaacttgcat
3421 ctaaactcga cctctacatt ttttatgttt atctctagta ttactcttta gacaaaaaaa
3481 ttgtagtaag aactattcat agagtgaatc gaaaacaata cgaaaatgta aacatttcct
3541 atacgtagta tatagagaca aaatagaaga aaccgttcat aattttctga ccaatgaaga
3601 atcatcaacg ctatcacttt ctgttcacaa agtatgcgca atccacatcg gtatagaata
3661 taatcgggga tgcctttatc ttgaaaaaat gcacccgcag cttcgctagt aatcagtaaa
3721 cgcgggaagt ggagtcaggc tttttttatg gaagagaaaa tagacaccaa agtagccttc
3781 ttctaacctt aacggaccta cagtgcaaaa agttatcaag agactgcatt atagagcgca
3841 caaaggagaa aaaaagtaat ctaagatgct ttgttagaaa aatagcgctc tcgggatgca
3901 tttttgtaga acaaaaaaga agtatagatt ctttgttggt aaaatagcgc tctcgcgttg
3961 catttctgtt ctgtaaaaat gcagctcaga ttctttgttt gaaaaattag cgctctcgcg
4021 ttgcattttt gttttacaaa aatgaagcac agattcttcg ttggtaaaat agcgctttcg
4081 cgttgcattt ctgttctgta aaaatgcagc tcagattctt tgtttgaaaa attagcgctc
4141 tcgcgttgca tttttgttct acaaaatgaa gcacagatgc ttcgttcagg tggcactttt
4201 cggggaaatg tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct aaatacattc aaatatgtat
4261 ccgctcatga gacaataacc ctgataaatg cttcaataat attgaaaaag gaagagtatg
4321 agtattcaac atttccgtgt cgcccttatt cccttttttg cggcattttg ccttcctgtt
4381 tttgctcacc cagaaacgct ggtgaaagta aaagatgctg aagatcagtt gggtgcacga
4441 gtgggttaca tcgaactgga tctcaacagc ggtaagatcc ttgagagttt tcgccccgaa
4501 gaacgttttc caatgatgag cacttttaaa gttctgctat gtggcgcggt attatcccgt
4561 attgacgccg ggcaagagca actcggtcgc cgcatacact attctcagaa tgacttggtt
4621 gagtactcac cagtcacaga aaagcatctt acggatggca tgacagtaag agaattatgc
4681 agtgctgcca taaccatgag tgataacact gcggccaact tacttctgac aacgatcgga
4741 ggaccgaagg agctaaccgc ttttttgcac aacatggggg atcatgtaac tcgccttgat
4801 cgttgggaac cggagctgaa tgaagccata ccaaacgacg agcgtgacac cacgatgcct
4861 gtagcaatgg caacaacgtt gcgcaaacta ttaactggcg aactacttac tctagcttcc
4921 cggcaacaat taatagactg gatggaggcg gataaagttg caggaccact tctgcgctcg
4981 gcccttccgg ctggctggtt tattgctgat aaatctggag ccggtgagcg tgggtctcgc
5041 ggtatcattg cagcactggg gccagatggt aagccctccc gtatcgtagt tatctacacg
5101 acggggagtc aggcaactat ggatgaacga aatagacaga tcgctgagat aggtgcctca
5161 ctgattaagc attggtaact gtcagaccaa gtttactcat atatacttta gattgattta
5221 aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc tttttgataa tctcatgacc
5281 aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa
5341 ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca
5401 ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac caactctttt tccgaaggta
5461 actggcttca gcagagcgca gataccaaat actgtccttc tagtgtagcc gtagttaggc
5521 caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat cctgttacca
5581 gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag acgatagtta
5641 ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag
5701 cgaacgacct acaccgaact gagataccta cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt
5761 cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc
5821 acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac
5881 ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac
5941 gccagcaacg cggcttttta cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct cacatgttct
6001 ttcctgcgtt atcccctgat tctgtggata accgtattac cgcctttgag tgagctgata
6061 ccgctcgccg cagccgaacg accgagcgca gcgagtcagt gagcgaggaa gcggaagagc
6121 gcccaatacg caaaccgcct ctccccgcgc gttggccgat tcattaatgc agctggcacg
6181 acaggtttcc cgactggaaa
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