1 将目的基因片段构建至植物载体中; 2 将构建好的质粒转化农杆菌GV3101或EHA105; 3 农杆菌介导遗传转化、筛选(花序侵染);T0代种子筛选;T1代阳性苗的PCR鉴定。
技术简介
农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌,它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位(受伤处的细胞会分泌大量酚类化合物,从而使农杆菌移向这些细胞),并诱导产生冠瘿瘤或发状根。
根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒,其上有一段T-DNA,农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后,可将T-DNA插入到植物基因组中,并且可以通过减数分裂稳定的遗传给后代,这一特性成为农杆菌介导法植物转基因的理论基础。
将目的基因片段构建到植物表达载体上(改造过的Ti质粒),转入农杆菌后T-DNA会与一系列Vir蛋白结合,在农杆菌侵染宿主时,目的基因的T-DNA片段会在该系列蛋白作用下转入宿主细胞并整合到宿主基因组内,从而实现转基因。
应用领域
农杆菌介导的拟南芥转基因研究,成为研究基因功能的重要手段,该技术可以使重组生物增加人们所期望的新性状,培育出新品种;是开展植物基因工程研究的经典方法。
服务内容
项目分类 | 服务内容 |
植物载体构建 | 将目的基因片段构建至植物载体中 |
农杆菌转化 | 将构建好的质粒转化农杆菌GV3101或EHA105 |
转基因拟南芥筛选鉴定 | 农杆菌介导遗传转化、筛选(花序侵染);T0代种子筛选;T1代阳性苗的PCR鉴定 |
注:1. 拟南芥品种:哥伦比亚
2. 根据不同的载体系统及待转基因的特性,有时转基因植株生长周期会发生变化;如果待转基因为败育、致死或发育、开花相关基因,我们不能保证实验结果及周期。
3. 因待转基因特性具有不确定性,且实验周期较长,自2015年8月1日起的新订单,如果遇到个别实验失败,无法筛得阳性株,仍需酌情收取30%实验基础费用,敬请理解。
技术优势
1. 专业技术平台。从事多年转基因植物的技术团队,多种转化技术手段保证实验成功率。
2. 高效的实验机制。全年不间断种植转基因受体,随时开展转基因实验项目。
3. 提供实验全程进展,提供遗传转化、筛选的部分图片和T0代转基因苗,外源基因PCR检测等琼脂糖凝胶电泳图。
服务流程(图)
载体构建——农杆菌转化——花序侵染——分批收取种子及筛选(T0)——T1代阳性苗的PCR鉴定
服务周期
1. 等待野生型拟南芥开花批次(每半月一批)/ 载体构建及农杆菌转化周期
2. 花序侵染(T0) 30天
3. 分批收取种子及筛选(T1) 40天
4. 真叶期移栽及T1代苗PCR鉴定 20天
5. T1代阳性苗収种 60天
您需要提供以下材料:
1. 目的基因的模板与载体构建方案
2. 尽可能详细的实验信息与其他要求
您将获得以下结果:
1. 遗传转化与筛选的部分图片;
2. T1代转基因苗外源基因PCR检测的琼脂糖凝胶电泳图;
3. T1代转基因苗及其种子。(3个阳性株系)
实验结果图片示例