油菜的转基因技术在20世纪90年代获得成功。获得大量转基因植株是加速基因功能研究、种质资源创新和转基因育种的重要前提。不同基因型油菜品种转化效率差异很大,目前转化效率最高的基因型是春油菜品种Westar,为5%左右。本技术平台以Westar为受体,经过条件优化,转化效率可以达到20%,已成功获得大量过量表达、RNAi和基因敲除(CRISPR/Cas9)转基因植株。
技术简介
农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌,它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位(受伤处的细胞会分泌大量酚类化合物,从而使农杆菌移向这些细胞),并诱导产生冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒,其上有一段T-DNA,农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后,可将T-DNA插入到植物基因组中,并且可以通过减数分裂稳定的遗传给后代,这一特性成为农杆菌介导法植物转基因的理论基础。
我们采用农杆菌介导法,实现油菜遗传转化。客户可提供目的基因、质粒、农杆菌等,我们为您完成从构建载体到获得转基因苗的整个实验过程。
应用领域
农杆菌介导的转基因研究,成为研究基因功能的重要手段,该技术可以使重组生物增加人们所期望的新性状,培育出新品种;是开展植物基因工程研究的经典方法。
服务内容
项目分类 | 服务内容 |
植物载体构建 | 将目的基因片段构建至植物载体中 |
农杆菌转化 | 将构建好的质粒转化农杆菌GV3101或EHA105 |
转基因拟油菜选鉴定 | 农杆菌介导遗传转化(共培养);筛选;阳性愈伤组织分化成苗、再生苗的生根、壮苗;T0代阳性苗的PCR鉴定。 |
注:1. 油菜品种:Westar
2. 根据不同的载体系统及待转基因的特性,有时转基因植株生长周期会发生变化;如果待转基因为败育、致死或发育、开花相关基因,我们不能保证实验结果及周期。
3. 因待转基因特性具有不确定性,且实验周期较长,自2015年8月1日起的新订单,如果遇到个别实验失败,无法筛得阳性株,仍需酌情收取30%实验基础费用,敬请理解。
技术优势
1. 专业技术平台。从事多年转基因植物的技术团队,多种转化技术手段保证实验成功率。
2. 高效的实验机制。全年不间断种植转基因受体,随时开展转基因实验项目。
3. 提供实验全程进展,提供遗传转化、筛选的部分图片和T0代转基因苗,外源基因PCR检测等琼脂糖凝胶电泳图。
服务流程(图)
油菜受体材料培养——载体构建——农杆菌转化——共培养转染——选择培养(筛选)——分化培养——生根培养——幼苗脱玻璃化——生根——移栽——T0代转基因苗外源基因PCR检测——成果提交
服务周期
全年均可开展实验;以Westar为受体的转基因服务,从转化开始到T0代转基因苗的检测结果,共需要4-5个月。如果客户要求自己提供受体品种,周期和价格协商确定。
您需要提供以下材料:
1. 客户提供需转化的载体,建议的选择标记为kanr或bar,也可选择本公司代为构建(费用另计)
2. 标准服务的转基因受体品种为Westar;如果客户要求自己提供受体品种,需要进行预备实验以确认该品种能否转化
3. 尽可能详细的实验信息与其他要求
您将获得以下结果:
1. 遗传转化与筛选的部分图片;胚性愈伤诱导不定芽的分化与再生部分样品的图片;
2. T0代转基因苗外源基因PCR检测的琼脂糖凝胶电泳图;
3. T0代转基因苗。(10-15个阳性株系)
实验结果图片示例
油菜遗传转化流程
A.播种;B.无菌苗;C.共培养;D.选择培养;E.分化培养;F.生根培养;G. 幼苗脱玻璃化;H.生根;I. 幼苗移栽