技术简介

      原位杂交技术（In situ hybridization，ISH）是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列，将有放射性或带荧光等标记的外源核酸（即探针）与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。

      这一技术不需要从组织细胞中提取核酸，对组织中含量极低的靶序列有很高的灵敏度，并可保持组织与细胞的结构完整，反映特异核酸分子的定位。特别是配合使用能定位特异蛋白分子的免疫细胞化学技术，就能对生理或病理条件下从DNA到mRNA到蛋白质这样一个基因表达过程进行定性和定位的分析，是基因表达研究强有力的手段。

      地高辛（Digoxigenin 简写Dig-）又称异羟基洋地黄毒甙配基，这种类固醇半抗原仅限于洋地黄类植物，其抗体与其它任何固醇类似物如人体中的性激素等无交叉反应。近年来，地高辛（Digoxigonin）标记技术引起科技工作者的极大兴趣。1987年，地高辛标记的有关试剂及药盒投放市场。地高辛标记法显示的颜色为紫蓝色（标记碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶显色系统），有较好的反差背景。

      地高辛较放射性标记系统安全，方便、省时间。同时在敏感性和质量控制方面比生物素标记技术要优越，可以检测出人基因组DNA中的单拷贝基因，是目前应用最广泛的非放射性标记探针。采用的方法是利用末端转移酶在单链3′-羟基端直接添加DIG-11-dUTP ，从而使地高辛掺入到序列末端,达到标记的目的。地高辛标记的 cDNA、RNA和寡核苷酸探针，不但探针的具有生物素标记优点，还克服了生物素标记的探针在原位杂交过程中受组织内源性生物素干忧等缺点，其应用越来越广泛。

      本公司进行的RNA原位杂交主要是利用地高辛标记的反义RNA为探针，与切片杂交，从而原位的显示RNA的表达部位和相对丰度。

      原位杂交能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究而不受同一组织中其它成分的影响，因此对于那些细胞数量少且散在于其他组织中的细胞内DNA或RNA研究更为方便；由于原位杂交不需要从组织中提取核酸，对于组织中含量极低的靶序列有极高的敏感性，并可完整地保持组织与细胞的形态，更能准确地反映出组织细胞的相互关系及功能状态。

服务内容

注：

1. 组织取材应尽可能新鲜。由于组织RNA降解较快，所以新鲜组织和培养细胞最好在30 min 内固定。

2. 固定时间越长，mRNA破坏的越多；做原位杂交组织固定时间不宜过长，一般24h。

3. 在整个杂交前处理过程都需戴消毒手套，避免RNA污染。

4. 每个样本先做2-3张预实验片。

服务流程

样品与实验结果

实验结果示例